一、参考法式： 霸凌 拳交
《GB4789.29-2020食物安天下度法式 食物微生物学实验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）实验》。
二、菌种特征：
1、生物学性情：
革兰氏阴性杆菌，长2.5-3μm，宽0.5-1.0μm，呈杆状、球杆状或稍障碍，两头钝圆，无芽胞，有鞭毛。本菌为兼性厌氧，但易在名义孕育。最适孕育温度为37℃，最适产毒温度为26℃。pH 5-7限制内孕育较好。
2、流行病学特质：
椰毒假单胞菌酵米面亚种（Psedomonas cocovenenans subsp.farino fermentans)是我国发现的一种食物中毒菌，为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）的一个病原型。它存在于发酵的玉米、糯玉米、黄米、高梁米、变质银耳以及周围环境中，它是酵米面及变质银耳中毒的病原菌。该菌产生的毒素米酵菌酸是其致病原因。该食物中毒的主要症状，运行患者感到上腹部不适，少数出现泻肚、恶心、吐逆，吐逆物多为咖啡色，严重者出现黄疸、昏厥、算作抽搐、少尿、血尿、便血和尿潴留，呈现休克而物化。现在尚无殊效的调治目标。
三、培养基旨趣分析及后果：
1、鼎新马铃薯葡萄糖琼脂（mPDA）（点击此稽察培养基确定）
旨趣：马铃薯为微生物的孕育提供各种氮源、碳源、维生素，葡萄糖提供能源，琼脂是培养基的凝固剂，氯霉素可胁制细菌的孕育，龙胆紫胁制真菌的孕育。
后果：培养24 h后，菌落1 mm-2 mm，紫色，光滑、湿润、角落整王人；培养48h后，部分菌落中心可有呈凉帽状独特。如图一。
图一 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌ATCC10248培养48h
2、PCFA培养基（点此稽察培养基确定）
旨趣：PCFA培养基基础中的氯化铵为微生物的孕育提供氮源；磷酸二氢钾和磷酸氢二钠是缓冲剂；氯化钠可督察细胞浸透压；氯化钙、硫酸镁和硫酸亚铁为微生物孕育提供微量元素；葡萄糖和胱氨酸用于唐菖蒲伯克霍尔德氏菌代谢酶的合成；卫矛醇可为微生物孕育提供碳源；琼脂是培养基凝固剂。配套添加剂可胁制大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌等革兰氏阴性杆菌孕育，同期也可胁制大部分革兰氏阳性球菌的孕育。
后果：培养24 h后，菌落0.5 mm-1 mm，灰白色，光滑、湿润、角落整王人。如图二。
图二 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌ATCC10248培养48h
3、卵黄琼脂
旨趣：卵白胨和牛肉粉提供碳氮源、维生素和孕育因子；葡萄糖提供能源；氯化钠督察平衡的浸透压；琼脂是培养基的凝固剂；具有卵磷脂酶的细菌可明白卵磷脂生成不溶性甘油酯，从而酿成乳白色的沾污带。
后果：培养24 h后，菌落2 mm-3 mm，名义光滑、湿润；培养48 h后，菌落周围酿成乳白色沾污环，斜射光下可见菌落及周围培养基名义呈虹彩局势。如图三。
图三 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌ATCC10248培养48h
四、生化刚烈旨趣及后果分析：
1、革兰氏染色
实验所用试剂：革兰氏染色液试剂盒。
旨趣：革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网端倪较多且交联精细，故遇酒精或丙酮消亡处分时，因失水反而使网孔减轻，再加上它不含类脂，故酒精处分不会出现谬误，因此，能把结晶紫与碘复合物紧紧留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇消亡剂后，以类脂为主的外膜赶快熔解，薄而松散的肽聚糖网不行抵触结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过酒精消亡后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
后果：革兰氏阴性，菌体呈短杆状，单个或成对摆列。如图四所示。
图四
2、氧化酶实验
实验所用试剂：氧化酶试纸霸凌 拳交。
旨趣：氧化酶即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的最后呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生神思反馈。在 30s内变为蓝色或蓝紫色为强阳性，2min内不变色为阴性。
后果：不变色，为阴性。如图五
图五 左：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌ATCC10248 右：铜绿假单胞菌ATCC9027
3、尿素酶实验
实验所用试剂：尿素酶生化管。
旨趣：有些细菌能产生尿素酶，将尿素明白、产生氨，使培养基变碱呈粉红色。
后果：培养基变为粉红色，为阳性。如图六。
左：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌ATCC10248 右：大肠埃希氏菌ATCC25922
图六
4、柠檬酸盐应用实验
实验所用培养基：西蒙氏枸橼酸盐培养基。
旨趣：西蒙氏枸橼酸盐培养基中氯化钠督察平衡的浸透压，镁离子是各式代谢中的辅因子，磷酸二氢铵提供氮源，磷酸氢二钾是缓冲剂，柠檬酸钠作为碳源，琼脂是培养基的凝固剂，溴麝香草酚兰为pH 素质剂。当细菌不错应用铵盐作为独一的氮源，同期应用柠檬酸盐作为独一的碳源时，可在柠檬酸盐培养基上孕育，明白柠檬酸钠，生成碳酸钠，使培养基产碱变蓝色。
后果：培养基变蓝，为阳性。如图七。
左：大肠埃希氏菌ATCC25922 右：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌ATCC10248
图七
5、石蕊牛奶实验
实验所用培养基：石蕊牛奶培养基。
旨趣：牛奶中含有乳糖以及三种主要的卵白质，即酪卵白、乳清卵白和乳球卵白。在石蕊牛奶培养基中，微生物可能发达出一种或几种代谢性情，每一种性情专属于特定 菌种，不错赞成细菌的刚烈。这些代谢性情包括乳糖发酵、石蕊回复、凝乳产生、胨化（卵白消化）和产气。石蕊是雅致的酸碱素质剂，自己的氧化回复性情及对细菌的低毒性（相干于溴甲酚紫）使得石蕊因素尽头有效的牛奶培养基素质剂。
后果：顶部淡紫色，底部乳白色。如图八。
左：空缺对照 右：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌ATCC10248
图八
6、靛基质实验
实验所用培养基、试剂：卵白胨水（色氨酸肉汤）、Kovacs靛基质试剂。
旨趣：卵白胨为微生物的孕育提供碳氮源、维生素和孕育因子；氯化钠督察平衡的浸透压；含有色氨酸酶的细菌，能明白卵白胨中的色氨酸，酿成靛基质（吲哚），靛基质无色，当加入对氨基苯甲酸试剂后，酿成可见的红紫色醌式化合物，即玫瑰靛基质。
后果：滴加Kovacs靛基质试剂后产生黄色环，为阴性。如图九
左：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌ATCC10248 右：大肠埃希氏菌ATCC25922
图九
注：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌其它生化特征见下表。
生化实验
特征
O/F实验（氧化型）
骚妹妹＋
氧化
葡萄糖
＋
果糖
＋
木糖
＋
半乳糖
＋
蔗糖
－
阿拉伯糖
＋
甘霖醇
＋
侧金盏花醇
＋
肌醇
＋
卫茅醇
＋
能源
＋
卵磷脂酶
＋
氧化酶
－
尿素
＋
明胶液化
＋
硝酸盐回复
＋
柠檬酸盐应用
＋
精氨酸
＋
石蕊牛乳
＋
靛基质
－
V-P
－
MR
－
苯丙氨酸脱氨酶
－
H2S产生
－
注：＋暗示阳性；－暗示阴性。
注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。
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